Here we describe the detection and characterisation of three isolates of vancomycin-resistant VanB-type Enterococcus faecalis. Sequence analysis suggested that these isolates harboured the vanB1 gene. The isolates were susceptible to the majority of antimicrobial agents tested, with the exception of chloramphenicol, erythromycin and vancomycin, and showed distinct profiles of high-level resistance to aminoglycosides. Analysis of the clonal relatedness of the vanB E. faecalis isolates showed similar pulsed-field gel electrophoresis profiles. To our knowledge, this is the first report of the occurrence of enterococcal strains carrying vanB genes in Brazil.

Carbapenemase production is an important mechanism of carbapenem resistance among nonfermentative Gram-negative isolates. This study aimed to report the detection of blaOXA-58 gene in multiresistant clinical isolates of Acinetobacter baumannii recovered from inpatients in a public hospital. Polymerase chain reaction tests were performed to detect the blaOXA-23-like, blaOXA-24-like, blaOXA-58-like and blaOXA-51-like genes. The blaOXA-58 and blaOXA-23 genes were detected in one and three isolates, respectively. Sequencing of the blaOXA-58-like amplicon revealed 100% identity with the A. baumannii blaOXA-58 gene listed in the GenBank database. This is the first report of an OXA-58-producing A. baumannii isolate in Rio de Janeiro, Brazil.

INTRODUÇÃO E OBJETIVO: Entre os bacilos Gram-negativos não fermentadores da glicose, Pseudomonas aeruginosa e Acinetobacter baumannii são os agentes etiológicos de infecções hospitalares mais frequentes. A resistência aos carbapenemas entre esses patógenos está se tornando um problema terapêutico mundial e a produção de metalo-beta-lactamases (MBL) tem emergido como um dos mecanismos responsáveis por esta resistência. O presente estudo objetivou verificar a produção de MBL em amostras de P. aeruginosa e A. baumannii isoladas de pacientes internados no Hospital Estadual Azevedo Lima, localizado em Niterói-RJ. MATERIAL E MÉTODOS: Um total de 400 amostras (286 P. aeruginosa e 114 A. baumannii) foi identificado por meio de sistemas comerciais e sua susceptibilidade aos antimicrobianos foi testada por disco-difusão. As amostras resistentes a ceftazidima foram submetidas à avaliação da produção de MBL pelo método de disco-aproximação. RESULTADOS: A produção de MBL foi verificada em 49 amostras de P. aeruginosa (17,1%) e em 20 amostras de A. baumannii (17,5%). Grande parte das amostras de P. aeruginosa e de A. baumannii foi resistente a todos os antimicrobianos testados. CONCLUSÃO: A produção de MBL é um dos mecanismos de resistência aos carbapenemas e outros beta-lactâmicos entre amostras de P. aeruginosa e A. baumannii isoladas no hospital-alvo desta investigação. A rápida detecção deste fenótipo de resistência é essencial para implementar medidas rígidas de controle de infecção e permitir o início de terapia empírica adequada.

INTRODUCTION AND OBJECTIVE: P. aeruginosa and A. baumannii are the most prevalent etiological agents of hospital infections among non-fermentative gram-negative bacilli. Carbapenem resistance among these pathogens has become a therapeutic problem worldwide. Metallo-beta-lactamases (MBL) production has emerged as one of the mechanisms responsible for this resistance. The aim of the present study was to assess MBL production in clinical isolates of P. aeruginosa and A. baumannii from inpatients at Hospital Estadual Azevedo Lima, Niterói, RJ. MATERIAL AND METHODS: A total of 400 strains of P. aeruginosa (286) and A. baumannii (114) were identified through commercial systems. Antimicrobial susceptibility was tested by disk diffusion. Isolates resistant to ceftazidime were screened for MBL production by disk approximation test. RESULTS: MBL production was detected in 49 (17.1%) P. aeruginosa isolates and in 20 (17.5%) A. baumannii isolates. Most P. aeruginosa and A. baumannii samples were resistant to all antimicrobial agents. CONCLUSION: Production of MBL is one of the mechanisms of carbapenem resistance and other beta-lactams among P. aeruginosa and A. baumannii isolates in the investigated hospital. The rapid detection of this resistance phenotype is essential to implement strict infection control procedures and initiate appropriate empirical therapy.

The enterococci are important nosocomial pathogens with a remarkable capacity of expressing resistance to several antimicrobial agents. Their ubiquitous nature and resistance to adverse environmental conditions take account for their ability to colonize different habitats and for their potential for easy spreading through the food chain. In the present study we evaluated the distribution of species and antimicrobial susceptibility among enterococcal isolates recovered from food obtained in retail stores in Rio de Janeiro, Brazil. The following species were identified among 167 isolates obtained from poultry meat and 127 from pasteurized milk: Enterococcus faecalis (62.6%), E. casseliflavus (17.3%), E. durans (6.5%), E. gallinarum (3.0%), E. gilvus (2.4%), E. faecium (2.0%), E. hirae (1.4%), and E. sulfureus (1.0%). The overall percentages of antimicrobial resistant isolates were: 31.2 % to tetracycline, 23.8% to erythromycin, 11.3% to streptomycin, 4.3% to chloramphenicol, 3.9% to gentamicin, 1.4% to norfloxacin, 1.1% to imipenem, 0.7% to ciprofloxacin, nitrofurantoin, and penicillin, and 0.4% to ampicillin. Intermediate resistance was detected in frequencies varying from 0.5% for linezolid to 58.2% for erythromycin. None of the isolates showed resistance to glycopeptides. High-level resistance to aminoglycosides was observed in 13.1% of the isolates. Multiresistance was observed in E. faecalis, E. casseliflavus, E. faecium, E. gallinarum, E. durans and E. gilvus.

Amostras uropatogênicas de Escherichia coli isoladas de indivíduos moradores de localidades distintas na Cidade do Rio de Janeiro, foram caracterizadas quanto o sorotipo, propriedades hemolíticas e hemaglutinantes, susceptibilidade a antimicrobianos e perfil isoenzimático. O método molecular empregado associado com a investigação de marcadores de urovirulência, permitiu detectar uma grande diversidade entre os isolados. Entretanto, foi observada uma relação mais estreita entre amostras de Escherichia coli epidemiologicamente relacionadas.

Uropathogenic Escherichia coli strains isolated from individuals living in different areas of the city of Rio de Janeiro were characterized according to serotype, hemolytic properties, hemagglutination properties, antimicrobial susceptibility and isoenzymatic profile. The molecular approach used, together with investigation of urovirulence markers, enabled detection of great diversity among the isolates. However, closer relationships were observed between epidemiologically related Escherichia coli samples.

Foram estudadas 455 amostras de enterococos isolados de pacientes moradores da cidade de Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brasil, durante o período de julho 1996 a junho 1997 e foram identificados ao nível de espécies por testes fisiológicos convencionais e analisados sua susceptibilidade aos agentes antimicrobianos. A diversidade genética foi avaliada por eletroforese de campo pulsado ("pulsed-field gel electrophoresis", PFGE) com a enzima de restrição SmaI. A espécie mais freqüente encontrada foi o Enterococcus faecalis (92,8%). As outras espécies identificadas foram: E. faecium (2,9%), E. gallinarum (1,5%), E. avium (1,1%), E. hirae (0,7%), E. casseliflavus (0,4%), E. durans (0,4%) and E. raffinosus (0,2%). A prevalência de amostras com níveis elevados de resistência (HLR) aos aminoglicosídeos foram de 37,8%. HLR para gentamicina foi encontrada em 24,8% das amostras. Nenhuma amostra com resistência adquirida à vancomicina foi isolada. A análise através de PFGE revelou a predominância do grupo clonal A, constituído por amostras isoladas de diferentes materiais clínicos obtidos de pacientes internados em três hospitais. Esses resultados sugerem a disseminação intra e inter-hospital de um clone predominante, composto por amostras de E. faecalis apresentando níveis elevados de resistência a gentamicina, nos hospitais incluídos neste estudo.

In the present study, a total of 455 enterococcal isolates, recovered from patients living in the city of Porto Alegre, State of Rio Grande do Sul, Brazil, during the period from July 1996 to June 1997, were identified to the species level by conventional biochemical and microbiological tests, and assayed for their susceptibilities to antimicrobial agents. The genetic diversity of antimicrobial resistant strains was evaluated by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) analysis of SmaI restricted chromosomal DNA. The most frequent species was Enterococcus faecalis (92.8%). Other species identified were: E. faecium (2.9%), E. gallinarum (1.5%), E. avium (1.1%), E. hirae (0.7%), E. casseliflavus (0.4%), E. durans (0.4%) and E. raffinosus (0.2%). The overall prevalence of isolates with high-level resistance (HLR) to aminoglycosides was 37.8%. HLR to gentamicin was found in 24.8%. No strains with acquired resistance to vancomycin were found. PFGE analysis showed the predominance of clonal group A, comprising strains isolated from different clinical specimens obtained from patients in three hospitals. These results suggest intra and inter-hospital dissemination of one predominant clonal group of E. faecalis isolates with HLR to gentamicin in the hospitals included in this study.

A resistência a várias classes de agentes antimicrobianos é uma característica marcante dos enterococos observada em diferentes regiões geográficas. Informações sobre amostras isoladas na região sul do Brasil ainda são limitadas. No presente estudo, 455 enterococos isolados consecutivamente de pacientes moradores na cidade de Porto Alegre, Brasil, foram identificados ao nível de espécie e testados em relação a sua sensibilidade aos antimicrobianos através de testes de difusão em agar. As espécies mais freqüentes foram E. faecalis (92,8%), seguidas por E. faecium (2,9%), E. gallinarum (1,5%), E. avium (1,1%), E. hirae (0,7%), E. casseliflavus (0,4%), E. durans (0,4%) e E. raffinosus (0,2%). Os testes de sensibilidade revelaram que 62,0% das amostras foram resistentes à tetraciclina, 42,6% à eritromicina, 24,8% ao cloranfenicol, 22,6% à ciprofloxacina, 22,0% à norfloxacina, 3,5% à ampicilina e 3,5% á nitrofurantoína. Resistência a níveis elevados de aminoglicosídeos foi encontrada em 37,8% das amostras, com 23,5% sendo resistente à gentamicina, 14,3% à estreptomicina e 2,8% a ambos gentamicina e estreptomicina. Nenhuma amostra com resistência adquirida à vancomicina ou produtora de b-lactamase foi encontrada. Os resultados indicam um significante percentual de amostras resistentes a diferentes antimicrobianos, apontando a necessidade de estratégias de controle para evitar a disseminação de cepas resistentes e de vigilância contínua para a detecção de características emergentes de resistência.

Resistance to several classes of antimicrobial agents is a remarkable characteristic of enterococcal strains increasingly reported worldwide. Information about strains isolated in the southern region of Brazil is still limited. In this study, a total of 455 consecutive enterococcal isolates recovered from patients living in Porto Alegre, Brazil, were identified at species level and evaluated for their antimicrobial susceptibilities by agar diffusion testing. The most frequent species was E. faecalis (92.8%), followed by E. faecium (2.9%), E. gallinarum (1.5%), E. avium (1.1%), E. hirae (0.7%), E. casseliflavus (0.4%), E. durans (0.4%), and E. raffinosus (0.2%). According to the results of disk tests 62.0% of the strains were resistant to tetracycline, 42.6% to erythromycin, 24.8% to chloramphenicol, 22.6% to ciprofloxacin, 22.0% to norfloxacin, 3.5% to ampicillin, 3.5% to nitrofurantoin. High level resistance to aminoglycosides was found in 37.8% of the isolates, with 23.5% being resistant to gentamicin, 14.3% to streptomycin, and 2.8% to both gentamicin and streptomycin. No vancomycin resistant or b-lactamase producing isolates were found. The results indicate that a significant percentage of isolates are resistant to different antimicrobials, pointing out the need for control strategies to avoid dissemination of resistant isolates and for continuous surveillance for the detection of emerging resistance traits.

No presente estudo, 47 amostras enteropatogênicas de Escherichia coli, previamente caracterizadas pelo sorotipo, fenótipo de aderência, habilidade de induzir a formação da lesão histopatológica e presença das seqüências genéticas eae, bfp e EAF, foram analisadas de acordo com o perfil de fragmentação do DNA cromossômico pela técnica de eletroforese em campo pulsado (PFGE), as variantes isoenzimáticas através da eletroforese de isoenzimas (MLEE) e a presença de seqüências específicas da região LEE (eae, espA, espB, tir) e respectivos alelos. A amplificação destas seqüências mostrou a presença de 18 padrões genéticos distintos. A tipagem do gene eae revelou que a maior parte das amostras apresentou intimina não-tipável (42%) seguida dos tipos alélicos beta (35%), gama e alfa (12% cada). A fragmentação do DNA cromossômico detectou um elevado polimorfismo genético entre as amostras estudadas e não foi observada uma correlação com os marcadores de virulência investigados. Por outro lado, a análise das variantes isoenzimáticas sugeriu uma distribuição clonal específica de variantes genéticas do locus eae, o que nos leva a indicar a sua utilização como um marcador promissor para definir as relações genéticas neste grupo de microrganismos.

In the present study, 47 enteropathogenic Escherichia coli strains identified according to serotyping, presence of eae, bfp and EAF sequences, adherence phenotype and ability to induce attaching-effacing lesions were analyzed by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE), multilocus enzyme electrophoresis (MLEE), and the presence of LEE genes (eae, espA, espB, tir) as well as the respective alleles. Amplification of LEE genes subtypes revealed 18 different pathotypes. Typing of the eae gene showed that most strains contained nontypable intimin (42%) followed by beta (35%), gamma and alpha genes (12% each). PFGE analysis revealed a variable degree of polymorphism among isolates and, in general, no clear correlation was observed among PFGE profiles and the virulence markers identified. Otherwise, grouping based on MLEE analysis showed a close association between eae allele and clonal cluster distribution leading us to indicate the eae profile as a promising marker to establish relatedness among such microorganisms.

OBJETIVO: o Streptococcus pneumoniae habitualmente coloniza a orofaringe de pessoas sadias. O estado de portador assintomático está relacionado à invasão de estruturas adjacentes e ao surgimento de doença invasiva. Foi realizado estudo transversal, descritivo, objetivando verificar a prevalência de colonização de orofaringe pelo S. pneumoniae em crianças que freqüentam creches no município de Taubaté, SP, verificar a freqüência de sorotipos de Streptococcus pneumoniae nas cepas isoladas e relacionar os sorotipos mais freqüentes com os sorotipos presentes na composição da vacina pneumocócica heptavalente conjugada atualmente em uso. MÉTODOS: foram coletados, de 29 de junho a 15 de dezembro de 1998, 987 swabs de orofaringe de crianças entre 8 e 71 meses de idade, matriculadas nas creches municipais de Taubaté, SP. A identificação do S. pneumoniae foi baseada na observação das colônias que apresentassem hemólise parcial nos meios AS e AS-G, e pela observação da inibição do crescimento ao redor do disco de optoquina. A sorotipagem foi realizada pela reação de Quellung, utilizando anti-soros específicos, e adotado o sistema de nomenclatura dinamarquês. RESULTADOS: o Streptococcus pneumoniae foi isolado em 209 das 987 crianças (taxa de colonização= 21,1%). Vinte e oito sorotipos foram identificados. Os sete sorotipos mais freqüentes foram: 6A/6B (21,5%), 19F (14,8%), 18C (7,4%), 23F (7,4%), 9V (6,7%),14 (5,2%) e 10A (4,4%). Com exceção do sorotipo 10A, todos os outros seis estão incluídos na vacina. O único sorotipo vacinal não encontrado foi o sorotipo 4. CONCLUSÃO: estima-se, então, uma concordância de 63% entre os sorotipos colonizadores de orofaringe e os sorotipos presentes na vacina.

OBJECTIVE: Streptococcus pneumoniae usually colonizes the oropharynx of healthy people. Oropharyngeal carriage is related to the invasion of adjacent structures and to the development of invasive disease. A descriptive cross-sectional study was performed aiming at verifying the prevalence of oropharyngeal colonization by S. pneumoniae in children attending day care centers in the city of Taubaté - SP; verifying the frequency of S. pneumoniae serotypes in isolated strains; and relating the most frequent serotypes to the composition of the conjugated heptavalent pneumococcal vaccine currently in use. METHODS: from June 29 to December 15 1998, samples of oropharyngeal material were collected from 987 children, ranging from 8 to 71 months old, enrolled in day care centers in Taubaté - SP. The identification of S. pneumoniae was based on the observation of the colonies that presented partial hemolysis in agar-blood and agar-blood with gentamycin plates and on the observation of inhibited growth around the optochin disc. Serotyping was performed by the Quellung reaction, using specific antiserum, provided by the Centers for Disease Control and Prevention (Atlanta, GA/USA), and the Danish nomenclature system. RESULTS: as a result, S. pneumoniae was isolated from the oropharynx in 209 out of 987 children (colonization rate of 21.2%). Twenty eight serotypes were identified. The seven most frequent serotypes were: 6A/6B (21.5%), 19F (14.8%), 18C (7.4%), 23F (7.4%), 9V (6.7%), 14 (5.2%), 10A (4.4%). Except for serotype 10A, all the other six are included in the vaccine. The only vaccine serotype which was not found was serotype 4. CONCLUSION: agreement of 63% between the oropharynx colonizer serotypes and the serotypes present in the vaccine was found.

The cell surfaces of five enteropathogenic Escherichia coli serotypes (O111:H2; O111:H12; O125:H9; O119:H6; O26:H11) were assayed by chemical methods, lectin agglutination tests and spectroscopy associated to transmission electron microscopy. Results of lectin agglutination assays showed that all strains reacted with mannosebinding lectins. Strains belonging to serotype O125:H9 also agglutinated with lectins which recognize galactose and Nacetylgalactosamine residues. The bacterial cells were treated with 0.01M phosphate buffered saline (pH 7.0) at 100oC for 2 hr and the extracts were submitted to precipitation and fractionated by Cetavlon. Phosphate, total sugar and protein contents were determined. Gas liquid chomatography-mass spectrometry analysis of alditol acetates showed the presence of galactose, mannose, fucose, glucose and traces of ribose. Spectroscopic analysis of intact cells showed the presence of a capsule-like structure which was not totally preserved after extraction. Some cells were still surrounded by an amorphous capsular-like material after polysaccharide extraction.